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丁基疏水色譜柱在使用方面還是有些技巧的

更新時間:2024-02-27瀏覽:1023次
  丁基疏水色譜柱是一款以粒徑為2.5um的,丁基鍵合無孔型親水性聚合物基質(zhì)為填充劑的疏水作用色譜柱。適用于蛋白質(zhì)、單抗、酶等生物大分子的分離分析。由于和藥物安全以及生產(chǎn)成本息息相關(guān),對于重組蛋白藥物(包括單抗)的非均一性分析變得越來越被重視。
  采用具有適度疏水性的填料,以含鹽水溶液作流動相,借助于溶質(zhì)與固定相間的疏水相互作用實現(xiàn)分離的色譜方法。其保留機理與反相色譜基本相同,所不同的是其固定相的疏水性不如反相固定相強,多為低密度分布的甲基、乙基、丙基、丁基和苯基等。疏水作用色譜主要用于蛋白質(zhì)的分離與純化。
  以下是關(guān)于丁基疏水色譜柱的使用技巧:
  1、樣品預(yù)處理:在使用之前,需要對樣品進行適當?shù)念A(yù)處理。這可能包括去除雜質(zhì)、調(diào)整樣品的pH值、離子強度等,以確保樣品適合在丁基疏水色譜柱上進行分離。
  2、選擇合適的緩沖液:在進行丁基疏水色譜時,選擇合適的緩沖液對于分離效果至關(guān)重要。通常使用含有有機溶劑(如乙腈、異丙醇)的緩沖液,以促進生物大分子與色譜柱填料的疏水相互作用。
  3、優(yōu)化洗脫條件:根據(jù)樣品的特性和目的,優(yōu)化洗脫條件是非常重要的。通過調(diào)整洗脫緩沖液的成分、濃度和pH值,可以實現(xiàn)目標分子的高效洗脫。
  4、控制流速和壓力:在使用時,需要注意控制流速和壓力,避免過高的流速和壓力導致柱子破裂或分離效果不佳。
  5、監(jiān)測分離效果:在進行分離過程中,定期監(jiān)測分離效果是必要的??梢酝ㄟ^檢測吸光度、熒光強度等指標來評估分離效果,并根據(jù)需要調(diào)整操作參數(shù)。
  6、避免過載樣品:避免在樣品中加入過多的目標分子,以免超出色譜柱的承載能力,影響分離效果。
  7、注意保存和保養(yǎng):在使用完后,需要注意正確保存和保養(yǎng)色譜柱,避免污染和損壞。定期清洗和校準色譜柱,可以延長其使用壽命并保持分離效果。
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