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C18液相色譜柱使用過(guò)程中需要注意的事項(xiàng)

更新時(shí)間:2017-06-27瀏覽:5522次
C18柱是一種常用的反相色譜柱,它以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填料,因此有較高的碳含量和更好的疏水性,對(duì)各種類(lèi)型的生物大分子有更強(qiáng)的適應(yīng)能力,適用范圍較廣,是液相色譜儀分析中的色譜柱類(lèi)型。

C18液相色譜柱使用注意事項(xiàng):

1、新C18色譜柱在使用前,須先用甲醇或乙腈試劑以20倍柱體積低流速?zèng)_洗,作用是使固定相能充分潤(rùn)濕、碳鏈?zhǔn)嬲?,使色譜柱的性能達(dá)到狀態(tài)。具體操作是,將配制好65%的乙腈/水沖洗后,把色譜柱進(jìn)口端連接在色譜儀上,出口端放空(不可連上檢測(cè)器,以免污染了檢測(cè)器),以0.1ml/min~0.5ml/min的低流速將色譜柱中的清稀溶液吹干,過(guò)20分鐘后再接上檢測(cè)器,以1.0ml/min的流速,繼續(xù)沖洗2~8小時(shí);
2、液相色譜儀檢測(cè)分析樣品完畢后,須沖洗色譜柱。尤其是流動(dòng)相中含有酸或鹽時(shí),需將色譜柱中的酸或鹽沖洗干凈,通常建議用10%甲醇水沖洗20倍柱體積; 
3、若色譜柱處于長(zhǎng)期閑置狀態(tài)時(shí),要將色譜柱*沖洗,建議沖洗3-4小時(shí)以上,zui后保存在純有機(jī)試劑或高比例的有機(jī)試劑溶液(如90%甲醇水)中; 
4、由于C18柱的固定相疏水性較強(qiáng),在使用過(guò)程中盡量不要使用高水相條件,若水相比例過(guò)高易引起固定相疏水塌陷,引起柱效迅速下降,甚至造成不可逆的負(fù)面影響;由于碳載量高,表現(xiàn)尤為明顯,建議使用過(guò)程中水相比例不超過(guò)90%;
5、色譜柱壓力升高、柱性能下降:通常為色譜柱被污染,對(duì)色譜柱進(jìn)行再生處理可恢復(fù)部分柱效;  
6、色譜柱壓力驟升:通常由鹽析出或篩板堵塞引起,若是鹽析出,用10%甲醇水低流速?zèng)_ 洗至壓力恢復(fù)即可;若判斷并非鹽析出,以純甲醇或10%甲醇水為流動(dòng)相反沖色譜柱(將色譜柱反接,不接檢測(cè)器),若反沖半小時(shí)仍無(wú)效果則說(shuō)明反沖無(wú)效,需尋找其他原因。
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